FISH (флуоресцентная гибридизация in situ)

FISH — это метод молекулярной цитогенетики, при котором к определённым участкам ДНК в клетках присоединяют светящиеся метки-зонды и рассматривают их под флуоресцентным микроскопом. Так видно, сколько копий нужного гена есть в ядре, не утрачен ли участок и не соединились ли два гена, которые в норме расположены далеко друг от друга.

Название — аббревиатура английского fluorescence in situ hybridization, то есть флуоресцентная гибридизация in situ. Слова «in situ» (лат. «на месте») означают, что ДНК исследуют прямо в клетке или срезе ткани, не выделяя её. «Гибридизация» — соединение зонда с комплементарной (подходящей по последовательности) цепочкой ДНК.

⚙️ Как работает метод

1. Клетки из крови, костного мозга или ткани опухоли закрепляют на предметном стекле.
2. Двойную спираль ДНК нагреванием разделяют на одиночные цепи.
3. Наносят зонды — короткие участки ДНК, помеченные флуоресцентным красителем и подобранные к нужному гену или району хромосомы.
4. Зонды находят свою мишень и прочно с ней связываются.
5. Под флуоресцентным микроскопом специалист подсчитывает светящиеся точки в ядрах, обычно в сотнях клеток.

Разные гены метят разными цветами, например красным и зелёным. Если два гена слились в результате транслокации, их сигналы накладываются и дают жёлтую точку или пару соприкасающихся сигналов. Отсутствие одной точки говорит об утрате участка, лишние точки — о его умножении.

⚖️ Чем FISH отличается от других методов

FISH в сравнении с другими генетическими исследованиями

Метод	Что показывает	Ограничения
Стандартное кариотипирование	Весь набор хромосом, в том числе неожиданные поломки	Нужны делящиеся клетки, мелкие изменения не видны
FISH	Заранее выбранные участки, в том числе в неделящихся клетках	Находит только то, к чему подобран зонд
ПЦР	Конкретную мутацию или слитный ген с очень высокой чувствительностью	Не показывает общую картину хромосом
Секвенирование	Последовательность многих генов	Дороже, дольше, сложнее в интерпретации

Главное достоинство FISH — работа с клетками, которые не делятся, а также с фиксированной тканью и срезами биопсии. Поэтому метод дополняет кариотипирование, когда клетки не удалось вырастить или когда нужно быстро проверить конкретную поломку.

🩸 Где применяют FISH

• Лейкозы: поиск слитного гена BCR-ABL1 при хроническом миелолейкозе, транслокации t(15;17) с геном PML-RARA при остром промиелоцитарном лейкозе, перестроек гена KMT2A.
• Множественная миелома: выявление делеции 17p, транслокаций с участием 14-й хромосомы и других признаков высокого риска в очищенных плазматических клетках.
• Хронический лимфолейкоз: делеции 13q, 11q, 17p и трисомия 12.
• Лимфомы: перестройки генов MYC, BCL2, BCL6 в срезах ткани.
• Солидные опухоли: амплификация гена HER2 при раке молочной железы и желудка, перестройки ALK и ROS1 при раке лёгкого.
• Пренатальная и постнатальная диагностика: быстрый подсчёт хромосом 13, 18, 21, X и Y, поиск микроделеционных синдромов.

Многие из этих находок касаются онкогенов — генов, усиленная работа которых подталкивает клетку к опухолевому росту. От результата FISH нередко зависит выбор таргетного препарата или интенсивность лечения.

🧪 Материал и сроки

Для FISH используют аспират костного мозга, кровь, срезы ткани из парафиновых блоков, клетки амниотической жидкости. Материал из костного мозга и крови обычно берут в пробирку с гепарином и доставляют в лабораторию в течение суток, не замораживая. Подготовка пациента не нужна. Результат обычно готов за несколько дней, при срочных показаниях — быстрее.

📄 Как читать заключение

В заключении указывают использованный зонд, число просмотренных ядер, долю клеток с изменением и запись по международной номенклатуре ISCN. Небольшая доля клеток с изменением может оказаться на уровне технического фона, поэтому каждая лаборатория устанавливает собственный порог положительного результата. Отрицательный результат означает только, что исследованная поломка не найдена; другие изменения он не исключает.